中国林蛙(Rana Chensinensis)是我国重要的经济蛙类，也是黑龙江省优势药用价值动物资源之一。目前，国内针对中国林蛙的研究多见于雌性中国林蛙输卵管——蛤士蟆油的成分和功能等方面的报道，而对中国林蛙皮肤活性物质的研究少有报导。蛙类皮肤中含有丰富的具有特殊分子结构、功能复杂多样的生物活性物质，具有重要的应用价值及较大的开发利用潜力。着眼于疾病治疗因子的筛选和活性分子的发现，如能从中国林蛙皮肤中分离提取出具有重要价值的生物活性物质，必能丰富“北药”资源，为更有效的开发利用中国林蛙资源打下坚实地基础。 本试验选择黑龙江省帽儿山产中国林蛙的皮肤为研究材料，提取皮肤活性肽，并通过对提取体系、抽提温度、抽提时间等因素进行了筛选优化，确定了活性肽的最佳提取条件和技术路线。本试验摸索出用SDS-PAGE电泳分析小分子多肽的电泳条件，并建立了用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离提纯活性肽的实验方法。 本试验通过抑菌试验检测林蛙皮肤活性肽的生物活性，菌种为：大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、放线菌。试验结果表明：林蛙皮肤中小分子活性肽对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌具有一定的抗菌活性。说明中国林蛙皮...
中文摘要2-3
英文摘要3-4
缩略语表4-8
前言8-9
1 生物活性肽概述9-25
    1.1 生物活性肽的种类及其功能9-15
        1.1.1 生理活性肽9-13
        1.1.2 抗氧化肽13
        1.1.3 调味肽13-15
    1.2 两栖类皮肤活性肽与活性生物胺15-20
        1.2.1 两栖类皮肤活性肽的组织学分布15
        1.2.2 两栖类皮肤活性肽的特性15
        1.2.3 两栖类皮肤活性肽的种类、功能及其哺乳类对应物15-18
        1.2.4 两栖类皮肤活性生物胺18-19
        1.2.5 两栖类皮肤甾类化合物19-20
        1.2.6 皮肤活性肽的应用及前景20
    1.3 两栖类皮肤活性肽的研究现状20-24
        1.3.1 国外研究现状20-22
        1.3.2 国内研究现状22-24
    1.4 本研究预期目标24-25
2 试验材料和试验方法25-38
    2.1 试验试剂和仪器设备25-27
        2.1.1 试剂25-26
        2.1.2 仪器设备26-27
    2.2 试验样本采集27
    2.3 试验材料的制备27
        2.3.1 中国林蛙鲜皮的制备27
        2.3.2 中国林蛙干皮的制备27
    2.4 中国林蛙皮肤活性肽的提取27-29
    2.5 聚丙烯酰胺电泳图谱分析29-33
        2.5.1 原理29-30
        2.5.2 试验方法30-33
            2.5.2.1 组装凝胶模具30
            2.5.2.2 灌制分离胶30
            2.5.2.3 灌制浓缩胶30-31
            2.5.2.4 制备样品和上样31
            2.5.2.5 电泳31
            2.5.2.6 染色与脱色31-33
            2.5.2.7 结果分析33
            2.5.2.8 凝胶片干燥保存33
    2.6 凝胶过滤层析分离活性肽33-35
        2.6.1 凝胶过滤层析原理33
        2.6.2 填料的选择33-34
        2.6.3 层析柱尺寸的确定34
        2.6.4 凝胶层析34-35
    2.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯活性肽35-36
        2.7.1 试验方法35-36
    2.8 SDS-PAGE电泳测定活性肽的分子量36-38
        2.8.1 原理36
        2.8.2 试验方法36-37
        2.8.3 数据处理37-38
3 活性检测38-40
    3.1 试验器材和试剂38
        3.1.1 试验器材38
        3.1.2 试剂38
    3.2 试验菌株38-39
    3.3 试验方法39-40
        3.3.1 菌株的培养39
        3.3.2 抑菌试验39-40
4 试验质量控制40-41
5 结果41-53
    5.1 林蛙皮肤粉碎方法的确定41
    5.2 不同溶剂和浓度对林蛙皮肤蛋白多肽提取结果41-43
    5.3 80％甲醇提取蛋白多肽获得率与提取时间的关系43
    5.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱分析结果43-45
        5.4.1 不同浓度分离胶电泳分离结果43-45
        5.4.2 林蛙鲜皮与干皮中蛋白多肽分布对比情况45
    5.5 浓缩方法的选择45-47
    5.6 考马斯亮兰R-250及G-250染色结果47-48
    5.7 中国林蛙皮肤蛋白多肽分离纯化48-49
        5.7.1 中国林蛙皮肤蛋白多肽经凝胶过滤分离纯化48-49
        5.7.2 中国林蛙皮肤蛋白多肽PAGE电泳分离纯化49
    5.8 SDS-PAGE 电泳分子量测定结果49-51
        5.8.1 标准曲线的绘制49-50
        5.8.2 测定结果50-51
    5.9 中国林蛙皮肤蛋白多肽抑菌活性试验结果51-53
6 讨论与分析53-58
    6.1 中国林蛙皮肤蛋白多肽提取条件的选择53-54
    6.2 浓缩条件的筛选54-55
        6.2.1 浓缩方法的选择54
        6.2.2 浓缩剂的选择54-55
    6.3 中国林蛙皮肤活性肽分离纯化条件的选择55-56
    6.4 电泳分离胶浓度对蛋白多肽分离效果的影响56-57
    6.5 中国林蛙皮肤活性肽的活性分析57-58
7 结论与建议58-61
    7.1 结论58-59
    7.2 中国两栖类资源合理开发利用的几点建议59-61

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